飼料中水分的測定方法

1、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于測定配合飼料和單一飼料中水分含量，但用作飼料的奶制品，動物和植物油脂，礦物質(zhì)除外。

2、原理: 試樣在105±2℃烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分

3、儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。

分樣篩：孔徑0.45毫米（40目）

分析天秤：感量0.0001克。

電熱式恒溫烘箱：可控制溫度為105±2℃。

稱樣皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑40毫米以上，高25毫米以下。

干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠作干燥劑。

4、試樣的選取和制備

選取有代表性的試樣，其原始樣量應(yīng)在1000g以上用四分法將原始樣品縮減至500g，風(fēng)干后粉碎至40目，再用四分法縮至200g，裝入密封容器，放陰涼干燥處保存。如試樣是多汁的鮮樣，或無法粉碎時應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱取試樣200~300g，在105℃烘箱中烘15分鐘，立即降至65℃，烘干5~6小時，取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻4小時，稱重，即得風(fēng)干試樣。

5、測定步驟

潔凈稱樣皿，在105±2℃烘箱中烘1小時，取出在干燥器中冷卻30分鐘，稱準(zhǔn)至0.0002克，再烘干30分鐘，同樣冷卻，稱重，直至兩次重量之差小于0.0005克為恒重。

用已恒重稱樣皿稱取兩份平行樣，每份2~5克含水量0.1克以上，樣品厚度4毫米以下，準(zhǔn)確至0.0002克，不蓋稱樣皿蓋，在105±2℃烘箱中烘烘3小時，以溫度到達(dá)105℃開始計時，取出蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30分鐘，稱重。

再同樣烘干1小時，冷卻，稱重，直至兩次稱重之重量差小于0.002克。

測定結(jié)果的計算

計算公式：水分（%）=（W1—W2）/（W1—W0）×100

式中：W1—105℃烘干前的試樣及稱樣皿的重量，g；

W2—105℃烘干后試樣及稱樣皿的重量，g；

W0—已恒重的稱樣皿的重量，g。

重復(fù)性

每個試樣，應(yīng)取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果，兩個平行樣測定值相差不得超過0.2%，否則重做。

6、注意事項(xiàng)

1）如果試樣進(jìn)行過預(yù)先干燥處理，應(yīng)按下式計算原來試樣的所含水分總量：

原試樣總水分（%）=預(yù)干燥減重（%）+[100—預(yù)干燥減重（%）] ×風(fēng)干試樣水分（%）

2）某些含脂肪高的樣品，烘干時間長反而增重，乃脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前那次重量為準(zhǔn)。

3）含糖分高的易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法（70℃，600mm汞柱以下，烘干5小時）測定水份。

試樣經(jīng)灼燒完全后，余下的殘留物質(zhì)（如氧化物和鹽）稱為灰分。灰分有水溶性與水不溶性，酸溶性、酸不溶性。水溶性灰分大部分是鉀、鈉、鈣、鎂等氧化物和可溶性鹽，水不溶性灰分除泥沙外，還有鐵、鋁等的氧化物和堿土金屬的堿式磷酸鹽。酸不溶性灰分大部分為污染摻入的泥沙和原來存在于動植物組織中經(jīng)灼燒成的二氧化硅。

5.1 測定原理

飼料中灰分的測定一般采用灰化法。將試樣在550℃燒灼，使構(gòu)成飼料有機(jī)物的主要元素C、N、H、等氧化，所余殘渣即飼料中所含各種礦物元素的氧化物、氯化物及碳酸鹽，以及混雜在飼料中粘土、砂粒等，稱為粗灰分。

5.2 儀器設(shè)備

樣品粉碎機(jī)，分析天平（感量0.0001g），電爐，坩堝鉗，馬福爐，瓷坩堝(50ml)，干燥器（變色硅膠作干燥劑）、40目分樣篩。

5.3 試劑及配制：0.5%氯化鐵墨水溶液（稱0.5g氯化鐵溶于100ml藍(lán)墨水中）

5.4 測定步驟

5.4.1 將帶蓋坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸0.5%氯化鐵墨水溶液編號。

5.4.2 將坩堝和蓋一起放入馬福爐，在550℃±20℃下灼燒30min，稱重再重復(fù)灼燒，冷卻、稱重，直至兩次重量之差小于0.0005g為恒重量。

5.4.3 在已知重量的坩堝中稱取2g左右試樣（不超過坩堝容量的一半，灰分重量應(yīng)在0.05g以上），在電爐上低溫碳化至無煙為止。

5.4.4 炭化后將坩堝移入馬福爐中，于550℃下灼燒3h，使全部樣品變成灰白色或紅棕色（含有錳）。待灰化結(jié)束后，待爐溫降至200℃下時打開爐門，將坩堝取出于空氣中冷卻1min.，放入干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣灼燒1h，冷卻，稱重，直至兩次重量之差小于0.001g 為恒重量。

5.5 結(jié)果計算

5.5.1 計算公式：

粗灰分=(W2-W0)/(W1-W0)*100%

式中：W0為已恒重量空坩堝重（g）；W1為坩堝加試樣重（g）；W0為灰化后坩堝加灰分重(g)。

5.5.2 重復(fù)性：每個試樣應(yīng)取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。

粗灰分含量在10%以上，允許相對偏差為0.5%；粗灰分含量在5-10%以上，允許相對偏差為1%；粗灰分含量在5%以下，允許相對偏差為5%。

5.6 注意事項(xiàng)

5.6.1 樣品開始炭化時，應(yīng)打開部分坩堝蓋，便于氣流流通；溫度應(yīng)逐漸上升，防止火力過大而使部分樣品顆粒被逸出的氣體帶走。

5.6.2 為了避免樣品氧化不足，不應(yīng)把樣品磨得太細(xì)，壓得過緊，樣品應(yīng)松松地放在坩堝內(nèi)。

5.6.3 灼燒溫度不宜超過600℃，否則會引起磷、硫等鹽的揮發(fā)。

5.6.4 灼燒殘渣顏色與試樣中各元素含量有關(guān)，含鐵高時為紅棕色，含錳高為淡藍(lán)色。但有明顯黑色炭粒時，為炭化不完全，應(yīng)延長灼燒時間。

飼料中純蛋白質(zhì)（真蛋白）的測定

一、測定原理

飼料蛋白質(zhì)經(jīng)沸水提取并在堿性溶液中被硫酸銅沉淀。過濾和洗滌后，可將純蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)含氮物分離，再用凱氏定氮法測定沉淀物中的蛋白質(zhì)含量。

二、儀器設(shè)備

（1）燒杯：200ml

（2）定型濾紙

（3）其他設(shè)備與粗蛋白質(zhì)測定法相同

三、試劑與配制

（1）100g.L-1硫酸銅溶液；分析純硫酸銅（5水硫酸銅）10g溶于100ml水中

（2）25g.L-1氫氧化鈉溶液：將2.5g分析純氫氧化鈉溶于100ml水中

（3）10g.L-1氯化鋇溶液：1g氯化鋇溶于100ml水中

（4）2mol.L鹽酸溶液

（5）其他試劑與粗蛋白質(zhì)測定法相同

四、測定步驟

準(zhǔn)確稱取試樣1g左右（精確至0.0001g）置于200ml燒杯中，加50ml水中，加熱至沸。

加入20ml硫酸銅溶液，20ml氫氧化鈉溶液，用玻璃棒充分?jǐn)嚢瑁胖?h以上。用定性濾紙過濾，然后用60~80攝氏度熱水洗滌沉淀5或6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾紙，直至不生成白色硫酸鋇沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65攝氏度烘箱干燥2h，然后全部轉(zhuǎn)移到凱氏燒瓶中，按半微量凱氏定氮法進(jìn)行氮的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)參照采用國際標(biāo)準(zhǔn)ISO 6490/2－1983《動物飼料——鈣含量測定——原子吸收分光光度法》。

　　1　主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用原子吸收分光光度法和滴定法測定食品中鈣。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種食品中鈣的測定。

　　第一篇　原子吸收分光光度法

　　2　原理

　　樣品經(jīng)濕消化后，導(dǎo)進(jìn)原子吸收分光光度計中，經(jīng)火焰原子化后，吸收422.7nm的共振線，其吸收量與含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。

　　3　試劑

　　要求使用往離子水，優(yōu)級純試劑。

　　3.1　鹽酸(GB 622)。

　　3.2　硝酸(GB 626)。

　　3.3　高氯酸(GB 623)。

　　3.4　混合酸消化液：硝酸與高氯酸比為4∶1。

　　3.5　0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加往離子水并稀釋至1000mL。

　　3.6　2%氧化鑭溶液：稱取25g氧化鑭(純度大于99.99%)，加75mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加往離子水稀釋至刻度。

　　3.7　鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取1.2486g碳酸鈣(純度大于99.99%)，加50mL往離子水，加鹽酸溶解，移進(jìn)1000mL容量瓶中，加2%氧化鑭稀釋至刻度。貯存于聚乙烯瓶內(nèi)，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500μg鈣。

　　3.8　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液：鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制見表1。

　　表1　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制

　　鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制后，貯存于聚乙烯瓶內(nèi)，4℃保存。

　　4　儀器與設(shè)備

　　所用玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用往離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。

　　4.1　實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

　　4.2　原子吸收分光光度計。

　　5　操縱步驟

　　5.1　樣品處理

　　5.1.1　樣品制備

　　微量元素分析的樣品制備過程中應(yīng)特別留意防止各種污染。所用設(shè)備如電磨、絞肉機(jī)、勻漿器、打壞機(jī)等必須是不銹鋼制品。所用容器必須使用玻璃或聚乙烯制品，做鈣測定的樣品不得用石磨研碎。濕樣(如蔬菜、水果、鮮魚、鮮肉等)用水沖洗干凈后，要用往離子水充分洗凈。干粉類樣品(如面粉、奶粉等)取樣后立即裝容器密封保存，防止空氣中的灰塵和水分污染。

　　5.1.2　樣品消化

　　精確稱取均勻樣品干樣0.5～1.5g(濕樣2.0～4.0g，飲料等液體樣品5.0～10.0g)于250mL高型燒杯，加混合酸消化液20～30mL，上蓋表皿。置于電熱板或電沙浴上加熱消化。如未消化好而酸液過少時，再補(bǔ)加幾毫升混合酸消化液，繼續(xù)加熱消化，直至無色透明為止。加幾毫升往離子水，加熱以除往多余的硝酸。待燒杯中的液體接近2～3mL時，取下冷卻。用往離子水洗并轉(zhuǎn)移于10mL刻度試管中，加往離子水定容至刻度(測鈣時用2%氧化鑭溶液稀釋定容)。

　　取與消化樣品相同量的混合酸消化液，按上述操縱做試劑空缺試驗(yàn)測定。

　　5.2　測定

　　將鈣、標(biāo)準(zhǔn)使用液分別配制不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，見表2，測定操縱參數(shù)見表3。

　　表2　不同濃度系列標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配制方法

　　（圖略）

　　表3　測定操縱參數(shù)

　　（圖略）

　　其他實(shí)驗(yàn)條件：儀器狹縫、空氣及乙快的流量、燈頭高度、元素?zé)綦娏鞯染词褂玫膬x器說明調(diào)至最佳狀態(tài)。

　　將消化好的樣液、試劑空缺液和各元素的標(biāo)準(zhǔn)濃度系列分別導(dǎo)進(jìn)火焰進(jìn)行測定。

　　5.3　計算

　　5.3.1　標(biāo)準(zhǔn)曲線法

　　以各濃度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液與對應(yīng)的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。它的線性相關(guān)系數(shù)為0.9996。

　　（圖略）

　　測定用樣品液及試劑空缺液由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出濃度值(c及c0，再按式(1)計算。

　　式中：X——樣品中元素的含量，同mg/100g；

　　c——測定用樣品中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；

　　c0——試劑空缺液中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；

　　V——樣品定容體積，mL；

　　f——稀釋倍數(shù)；

　　m——樣品質(zhì)量，g；

　　（圖略）

　　5.3.2　回回方程法

　　由各元素標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度與對應(yīng)的吸光度計算出回回方程(也可以輸進(jìn)計算器得出回回方程)，計算見式(2)。

　　c＝ay＋b……………………………………………(2)

　　式中：c——測定用樣品中元素的濃度(可由計算器直接得出，μg/mL)；

　　a——曲線斜率；

　　y——元素的吸收度；

　　b——曲線的截距。

　　由回回方程或計算器得出測定樣液及試劑空缺液的濃度后，再由式(3)計算。

　　式中各字母的含義同曲線法說明。

　　5.3.3　結(jié)果的重復(fù)性

　　同實(shí)驗(yàn)室平行測定或連續(xù)兩次測定結(jié)果的重現(xiàn)性鈣小于10%。

　　最低檢測限：鈣0.1μg。

　　第二篇　滴定法(EDTA法)

　　6　原理

　　鈣與氨羧絡(luò)合劑能定量地形成金屬絡(luò)合物，其穩(wěn)定性較鈣與指示劑所形成的絡(luò)合物為強(qiáng)。在適當(dāng)?shù)膒H值范圍內(nèi)，以氨羧絡(luò)合劑EDTA滴定，在達(dá)到當(dāng)量點(diǎn)時，EDTA就自指示劑絡(luò)合物中奪取鈣離子，使溶液呈現(xiàn)游離指示劑的顏色(終點(diǎn))。根據(jù)EDTA絡(luò)合劑用量，可計算鈣的含量。

　　7　試劑

　　要求使用往離子水，優(yōu)級純試劑。

　　7.1　1.25mol/L氫氧化鉀溶液：精確稱取71.13g氫氧化鉀，用往離子水稀釋至1000mL。

　　7.2　1%氰化鈉溶液：稱取1.0g氰化鈉，用往離子水稀釋至100mL。

　　7.3　0.05mol/L檸檬酸鈉溶液：稱取14.7g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)，用往離子水稀釋至1000mL。

　　7.4　混合酸消化液：硝酸(GB 626)與高氯酸(GB 623)比為4∶1。

　　7.5　EDTA溶液：精確稱取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)，用往離子水稀釋至1000mL，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用時稀釋10倍即可。

　　7.6　鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.1248g碳酸鈣(純度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL往離子水及3mL 0.5mol/L鹽酸溶解，移進(jìn)500mL容量瓶中，加往離子水稀釋至刻度，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于100μg鈣。

　　7.7　鈣紅指示劑：稱取0.1g鈣紅指示劑(C21O7N2SH14)，用往離子水稀釋至100mL，溶解后即可使用。貯存干冰箱中可保持一個半月以上。

　　8　儀器與設(shè)備

　　所有玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用往離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。

　　8.1　實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器：高型燒杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，堿式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，試管等。

　　8.2　電熱板：1000～3000W，消化樣品用。

　　9　樣品制備

　　同第一篇。

　　10　操縱步驟

　　10.1　樣品消化

　　同第一篇。

　　10.2　測定

　　10.2.1　標(biāo)定EDTA濃度

　　吸取0.5mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，以EDTA滴定，標(biāo)定其EDTA的濃度，根據(jù)滴定結(jié)果計算出每毫升EDTA相當(dāng)于鈣的毫克數(shù)，即滴定度(T)。

　　10.2.2　樣品及空缺滴定

　　吸取0.1～0.5mL(根據(jù)鈣的含量而定)樣品消化液及空缺于試管中，加1滴氰化鈉溶液和0.1mL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氫氧化鉀溶液，加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍EDTA溶液滴定，至指示劑由紫紅色變藍(lán)為止。

　　10.3　計算

　　樣品中該元素的含量按式(4)計算：

　　式中：X——樣品中元素含量，mg/100g；

　　T——EDTA滴定度，mg/mL；

　　V——滴定樣品時所用EDTA量，mL；

　　V0——滴定空缺時所用EDTA量，mL；

　　f——樣品稀釋倍數(shù)；

　　m——樣品稱重量，g。

　　11　結(jié)果的重復(fù)性

　　同實(shí)驗(yàn)室平行測定或連續(xù)兩次測定結(jié)果的重復(fù)性小于10%。

　　本方法的檢測范圍：5～50μg。